細(xì)菌的鞭毛染色
發(fā)布時間：2025-05-19 瀏覽次數(shù)：234
細(xì)菌的鞭毛染色，本應(yīng)該在細(xì)菌染色方法中，但鞭毛染色技術(shù)是細(xì)菌鑒定的難點，所以摘出來單獨講解。
鞭毛是細(xì)菌的運動器官，通過鞭毛染色，可以觀察到鞭毛形態(tài)、數(shù)量和鞭毛在菌體分布的位置，鞭毛數(shù)量和在菌體上的分布位置是鑒定細(xì)菌的重要依據(jù)之一。
細(xì)菌鞭毛比較細(xì)且很脆，很容易脫落，尤其是衰老的細(xì)胞鞭毛更容易脫落，所以，觀察鞭毛盡量選擇年幼的細(xì)菌。
1、實驗原理
細(xì)菌的鞭毛很細(xì)，需要先用媒染劑進(jìn)行處理，使媒染劑沉積在鞭毛表面，這樣鞭毛就可以變粗，繼續(xù)進(jìn)行染色后，就可以觀察清楚鞭毛。鞭毛染色的方法比較多，現(xiàn)在學(xué)習(xí)一種，既容易觀察又容易操作的染色方法——鍍銀染色法。
1958年，Rhodes根據(jù)Fontana的螺旋體改良鍍銀染色法，建立了一種細(xì)菌鞭毛鍍銀染色法，試劑分為媒染劑A液和銀染劑B液。該染色法的優(yōu)點是采用氨銀染色液作為核心染料，試劑比較靈敏，操作簡單，結(jié)果判斷可靠。
2、染液的配制
媒染液A液：10%單寧酸10mL加5mL飽和硫酸鉀鋁水溶液，再加1mL苯胺飽和水溶液形成沉淀，通過搖動又能重新溶解，加入5%FeCl3水溶液1mL形成黑色溶液，穩(wěn)定10min后使用。
銀染液B液：配制5%AgNO3水溶液100mL，取出其中10mL備用，再緩慢加入濃氨水（比重0.88）使形成的沉淀剛好重新溶解，最后把備用的10mLAgNO3溶液向其中逐滴加入，直到搖動后呈現(xiàn)輕微而穩(wěn)定的薄霧狀溶液為止，避光保存，可穩(wěn)定數(shù)周。
3、應(yīng)用
通過鞭毛染色，可以觀察到鞭毛形態(tài)、數(shù)量和鞭毛在菌體分布的位置，鞭毛數(shù)量和在菌體上的分布位置是鑒定細(xì)菌的重要依據(jù)之一，根據(jù)鞭毛的這些特征，可將有動力細(xì)菌分為單端極鞭毛菌、單端叢鞭毛菌、周鞭毛菌、側(cè)鞭毛菌。
4、操作步驟
（1）固定：取一片干凈的載玻片，在載玻片中央滴加少許蒸餾水，用接種環(huán)蘸取少量菌液，與蒸餾水混勻，自然晾干；
（2）初染：滴加一滴A液，使染液均勻地覆蓋到整個菌面，染色5min；
（3）沖洗：用洗瓶輕輕沖洗；
（4）復(fù)染：輕輕滴加幾滴B液沖去殘余的水分，再用B液進(jìn)行復(fù)染，約30s至1min。
（5）沖洗：當(dāng)涂片出現(xiàn)明顯的褐色時，立即用蒸餾水或去離子水充分沖洗。
（6）干燥：自然晾干；
（7）鏡檢：鞭毛較細(xì)，要用油鏡觀察。
5、注意事項
（1）鞭毛染色過程中，不能使用自來水沖洗，這一點跟前面有所不同；
（2）操作過程，動作要輕，不能破壞鞭毛的結(jié)構(gòu)；
（3）涂片只能自然晾干；
（4）選擇年幼菌種。
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