食品表面及加工環(huán)境表面取樣寶典
發(fā)布時(shí)間：2025-06-11 瀏覽次數(shù)：434
文章來源：六扇門公眾號
小六之前有介紹過環(huán)境取樣經(jīng)常采用的3個(gè)方法，接觸碟法（Contact plate method），采樣棉簽/采樣棒（Stick swab method），采樣海綿（Sponge/cloth method）等。具體這3種方法有哪些具體要求，本期我們看看國際標(biāo)準(zhǔn)中怎么要求？方法怎么使用？看看選擇這些采樣產(chǎn)品需要重視的性能參數(shù)有哪些？
國際上可參考的標(biāo)準(zhǔn)及關(guān)鍵內(nèi)容
ISO 18593 — Food chain surface sampling Methods
1.接觸碟法（Contact plate method）
只適用于平面采樣，不要使用接觸板法進(jìn)行定性檢測的取樣。
操作方法：牢固地按壓接觸板的瓊脂表面，對試驗(yàn)表面沒有任何橫向移動。按壓時(shí)間大約10s，取樣后立即關(guān)閉接觸板，并將其放回運(yùn)輸容器中。
2.棉簽/采樣棒（Stick swab method）
適用表面：難以觸及≤100 cm2的小區(qū)域（例如空心滾輪或電機(jī)外殼內(nèi)）
建議使用無菌一次性采樣棒，避免污染；對材料有要求，不能使用具有一定殘留的棉簽，表面取樣后很容易污染內(nèi)部。特別適用于環(huán)境微生物的定量檢測取樣，如指示菌。
操作方法：應(yīng)使用涂抹棒采集取難以觸及到的小面積位置（如空心滾輪或電機(jī)外殼內(nèi)部）。建議使用一次性無菌采樣棒。
?如果取樣區(qū)域是濕的，可以使用干棉簽/涂抹棒，需要中劑情況除外。
?如果取樣區(qū)域干燥，應(yīng)使用濕的棉簽/涂抹棒。
?為了提高微生物的回收率，最好使用預(yù)制有一定稀釋液的涂抹棒。
3.采樣海綿（Sponge/cloth method）
適用表面：大表面積> 100 cm2（例如，傳送帶，地板），如：致病菌定性檢測（1000 ~ 3000 cm2，美國FSIS 30 X 30 cm2）和不規(guī)則區(qū)域（如地板狹窄裂縫）。
?如果取樣區(qū)域是濕的，可以使用干海綿/布，需要中劑情況除外。
?如果要取樣的區(qū)域是干燥的，使用濕潤的海綿/布。
?為了增加微生物的回收率，最好使用濕潤的海綿/布。
ISO 17604— Carcass Sampling Methods
1.胴體切割
1）模具切割法
采樣范圍：表面精密采樣（如肌肉/脂肪界面）
工具：模具（例如：100 cm2）+手術(shù)刀
2）鉆子切割法
采樣范圍：深層組織取樣（如肌肉內(nèi)污染）
工具：無菌取心器（直徑5 ~ 10 mm）
2.海綿取樣方法
采樣范圍：用于較大區(qū)域的表面取樣，無損/快速/更適用于冷凍胴體。
工具：無菌木軸棉簽或海綿、衛(wèi)生棉簽、模具（可選）。
操作步驟：
?干海綿取樣：用10 mL稀釋液潤濕棉簽，在模板內(nèi)橫豎涂抹各10下，再次使用干拭子取樣。
?預(yù)濕海綿取樣在模板內(nèi)橫豎涂抹各10下。
3. 淋洗取樣法
采樣范圍：家禽和小型哺乳動物
操作步驟：用無菌稀釋液(400 mL~ 600 mL稀釋劑)沖洗胴體，覆蓋整個(gè)胴體。
ISO 18593 和 ISO 17604 對"采樣后，運(yùn)輸和保存”的要求
1. 接觸碟
采樣和測試之間的延遲應(yīng)盡可能短。
取樣后，將樣品放入1 °C～8 °C的保溫運(yùn)輸容器中，以一種不發(fā)生污染的方式，然后以1°C～8°C下運(yùn)輸。
樣品應(yīng)在取樣后的48小時(shí)內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)。 或者，樣品可以在運(yùn)輸容器中運(yùn)輸，以保持一致的溫度，這樣就不會發(fā)生污染。樣品應(yīng)從采樣到采樣48小時(shí)內(nèi)完成培養(yǎng)，考慮到從采樣到培養(yǎng)的時(shí)間，如果適當(dāng)?shù)脑?，可作為培養(yǎng)時(shí)間的一部分。
2. 采樣棉簽/采樣棒和采樣海綿
采樣和測試之間的間隔應(yīng)盡可能短。 樣品在放入絕緣運(yùn)輸容器之前最好要冷卻，并在1°C～8°C下進(jìn)行運(yùn)輸。 樣品最好在取樣后24小時(shí)內(nèi)進(jìn)行檢測。 如果在實(shí)驗(yàn)室收到樣品后延遲檢測，樣品應(yīng)保存在3 °C ± 2 °C中，最多不超過48小時(shí) 。
選擇采樣產(chǎn)品需要考慮的技術(shù)參數(shù)有哪些？
1. 采樣效果如何，尤其是生物膜的采集效果？
?采樣棒/海綿需要適應(yīng)溝槽、裂縫、凸起等不平整表面，增大接觸面積，有效刮擦和吸附附著在這些復(fù)雜結(jié)構(gòu)上的生物膜。
?能夠吸附和截留大量的液狀基質(zhì)（生物膜的主要組成部分）和脫離的生物膜碎片/微生物細(xì)胞。同時(shí)，材料的耐磨性也很重要，保證在擦拭時(shí)不掉渣或過度撕裂。
2. 中和液的中和效果如何？
?Letheen肉湯，對碘、季鍍鹽和氯消毒劑具有中和能力。但是它沒有能力中和汞、甲醛或戊二醛的能力。Letheen 肉湯具有一定的增菌能力，因此樣品采集后應(yīng)對其表面重新進(jìn)行消毒處理。
?D/E 中和緩沖液，可中和廣譜的消毒劑和防腐劑。并且具有增菌能力，所以樣品采集后必須對表面進(jìn)行再消毒處理。
?NB中和緩沖液，對含氯/碘制劑及過氧化物的消毒劑有一定中和效果，它不能有效地中和酚類汞類、甲醛或戊二醛類消毒劑，不含增菌效果，因此在樣品采集后不需要對采樣點(diǎn)進(jìn)行重新消毒。但是該配方含有芳基磺酸鹽復(fù)合物，如果采用分子檢驗(yàn)方法，需要注意避開。
?BPW緩沖液，具有增菌和易損傷菌的修復(fù)作用，中和消毒劑的能力最小，通常用于屠宰場環(huán)境采用，同樣，采樣后應(yīng)重新對其表面進(jìn)行消毒處理。
?無菌生理鹽水，其滲透壓基本與菌的細(xì)胞液相當(dāng)，可以起到緩沖保護(hù)作用。
?磷酸鹽緩沖液，除了對菌有保護(hù)作用，還可以調(diào)節(jié)pH。
3.采樣后，對現(xiàn)有環(huán)境是否有殘留？是否與后續(xù)檢測方法的兼容？
采樣工具建議不含以下成分，以減少殘留對環(huán)境對污染。
?某些殘留（如塑化劑、重金屬）可能遷移到食物中，構(gòu)成食品安全風(fēng)險(xiǎn)（需符合食品接觸材料法規(guī)）。
?已知的過敏源成分，減少過敏物源的影響；
?已知的PCR抑制劑，需要考慮與檢測方法的兼容性；
?動物源性物料，減少動物源物料的擔(dān)憂；
?ATP生物熒光，需要考慮與ATP檢測的聯(lián)合應(yīng)用。
